Molekulární fyziologie, genetika a biotechnologie rostlin

Přednášky v rámci bakalářských a magisterských programů

Zimní semestr: 

• Biofyzika
• Fyziologie abiotického stresu
• Molekulární biologie
• RNA technologie
• Systémová biologie
• Úvod do bioinformatiky
• Základy genomiky a proteomiky 

Letní semestr:

• Bioinformatika
• Hormonologie
• Molekulární fyziologie rostlin
• Metody molekulární biologie proteinů
• Radiobiologie a izotopové metody
  
• Základy molekulární biologie
• Základy proteomické analýzy
• ZS-Radioactive Waste

Provozní a bezpečnostní řád Laboratoří ústavu 225

Určení:

Tento provozní a bezpečnostní řád definuje pravidla provozu a práce v Laboratořích Ústavu molekulární biologie a radiobiologie Mendelovy univerzity v Brně (dále jen „laboratoř“). Platnost tohoto provozního řádu je vázána na dále uvedené vymezené pracovní činnosti, aktuální vybavení laboratoře a personální obsazení.

Zvláštní upozornění:

• V laboratořích se pracuje s geneticky modifikovanými organismy (GMO) a radionuklidy!
• V rámci prostoru ústavu se nachází kontrolované pásmo (KP), které je vymezeno hygienickými smyčkami. Kontrolované pásmo je prostor se zvýšeným výskytem ionizujícího záření. V tomto prostoru musí být dodržována pravidla podle atomového zákona (Zákon č. 263/2016 Sb.) a na něj navazujících vyhlášek.

Vymezení pracovní činnosti:

Laboratoře jsou určeny pro výzkumnou a výukovou činnost.  

Seznam důležitých přístrojů:

• Hmotnostní spektrometr
• Kultivační komory
• Scintilační detektor TRICARB
• Hlubokomraz. boxy
• Vysokootáčková centrifuga
• Hyperspektrální kamera, gasometr, fluorescenční kamera FlurCam
• Real time PCR, termocyclery
• Mikroskopy
• El. zdroje, elektroforézy, fastbloty,
• Lyofilizátor, koncentrátor vzorků, homogenizátor Retsch
• Laminární box
• Autoklávy, sterilizátor, inkubátory
• Analytické váhy
• Fotometr, třepačky, centrifugy, pH metr, magnetické míchačky, vortex, ultrazvuk. homogenizátor, termomixér, termoblok, mikrovlnná trouba, vakuová pumpa, lednice, mrazáky, dokumentační systém
• Mycí automat, výrobník ledové tříště

Seznam pracovníků laboratoře/pověřené osoby:

• Martin Černý (vedoucí laboratoře)
• Jan Novák (odpovědná osoba za KP)
• Miroslav Berka, Veronika Berková, Jaroslav Pavlů (odborní asistenti)
• Jan Smetana, Šárka Koukalová (technici)
• Seznámení se s pravidly pro práci v laboratoři provádí vyučující. Poučený pracovník je povinen provedené proškolení potvrdit svým podpisem. Bez úvodního proškolení a jeho stvrzení podpisem osoba v laboratoři nesmí pracovat.
• Poučení se specifickými pravidly pro práci v laboratořích KP provádí doc. Jan Novák (osoba odpovědná za KP). Poučený pracovník je povinen provedené proškolení potvrdit svým podpisem. Bez úvodního proškolení a jeho stvrzení podpisem osoba nesmí do KP vstoupit.
• V rámci základní výuky smí studenti pracovat v laboratoři výhradně pod dohledem oprávněného pracovníka. Vstup do laboratoře je studentům povolen pouze v doprovodu vyučujícího nebo pracovníků laboratoří. Celkový počet studentů v laboratoři nesmí překročit kapacitu laboratoře. Studenti pracující na svých závěrečných pracích, anebo podílející se na výzkumu, mohou v laboratoři pracovat samostatně za předpokladu, že byli řádně proškoleni pověřenou osobou a zároveň mají k práci souhlas vedoucího laboratoře a vedoucího své práce.
• Pracovat na přístrojích mohou jen pověřené a proškolené osoby. Čas na vytíženějších přístrojích je nutné si předem rezervovat, v případě kolize má přednost ta osoba, která má provedenou rezervaci.
• Každý pracovník a student musí být proškolen pro manipulaci s laboratorním vybavením.
• Manipulace s redukčními ventily plynových tlakových lahví a manipulace s tlakovými nádobami (autoklávy) je podmíněna platným proškolením osob, v případě zákonné povinnosti i pravidelně obnovovaného.
• Návody k jednotlivým přístrojům a vybavení jsou u vybavení na viditelném místě a pracovník se jimi musí řídit. Zařízení, u nichž nebyla provedena zákonem vyžadovaná pravidelná revize nebo zařízení, která touto revizí neprošla, nesmí být používána.
• Cizím osobám a pracovníkům z jiných laboratoří není dovoleno bez vědomí a písemného svolení vedoucího laboratoře používat jakékoliv vybavení laboratoře, manipulovat s ním nebo vybavení z laboratoře vynášet.
• Po skončení prací před odchodem z laboratoře je nutné uvést pracovní místo do původního stavu, vše po sobě uklidit a vrátit veškeré pomůcky na původní místo. Poslední odcházející zkontroluje, zda jsou všechny měřicí přístroje správně vypnuty, zda jsou vypnuty (a kde je to možné i od elektrické sítě odpojeny) elektrické spotřebiče, zda je dobře uzavřena lednice, dále zkontroluje, zda jsou dobře uzavřeny uzávěry vody a plynu. Zkontroluje stav redukčních ventilů na tlakových lahvích.
• Všechny závady, které se vyskytnou během práce je nutno neprodleně hlásit pracovníkům laboratoře.
• Každý pracovník a student musí být proškolen pro manipulaci s chemikáliemi, způsobem jejich uložení a evidence a s postupy při likvidaci chemického odpadu.
• S toxickými chemikáliemi s akutní toxicitou kategorie 1 a 2 mohou pracovat jen proškolení pracovníci (dle č. 350/2011 Sb., č. 258/2000 Sb). Proškolený pracovník je povinen při každé manipulaci s těmito látkami zapsat jméno, datum, název a množství odebrané z balení dané chemikálie do sešitku či formuláře (k dispozici v místě uložení dané chemikálie nebo ve složce společně s dalšími dokumenty pro laboratoř). Látky s akutní toxicitou kategorie 1 a 2 jsou uloženy v uzamykatelných boxech v laboratoři (klíče má u sebe jen oprávněná osoba). Uvedené nařízení se v plné míře vztahuje i na methanol.
• Použité chemické sklo a další náčiní se vždy po práci pečlivě umyje vodou s vhodným přípravkem a poté se opláchne ethanolem a čistou Milli-Q vodou. Pro mytí chemického skla lze využít i myčku (místnost P1042, kontaktní osoba Šárka Koukalová), je však nutné seznámit se s pravidly. Chemické sklo umyté v myčce by mělo být před uložením pečlivě osušeno.
• Při skladování připravených roztoků musí být roztok skladován v láhvi k tomu určené (reagenční láhev, nikoliv v odměrné baňce) a řádně označen (název, popřípadě složení, datum přípravy, kdo jej připravil, koncentrace, v případě roztoků zředěných kyselin a zásad i pH a v případě nebezpečných látek i varovné symboly).
• Dle vyhl. č. 180/2015 Sb., do laboratoře nemají povolený vstup ženy gravidní, kojící a do 9 měsíců po porodu. Studentky jsou povinny vyučujícímu graviditu neprodleně ohlásit.
• Osoby mající lékařské omezení, které by mohlo ohrozit bezpečnost práce v laboratoři, jsou povinny tuto skutečnost neprodleně sdělit doc. Janu Novákovi nebo vedoucímu laboratoře doc. Martinovi Černému a to ještě před samotným vstupem do laboratoře.

Přístup do laboratoře a pracovní režim:

Zvláštní pokyny k zajištění bezpečnosti práce a ochranné pomůcky:

Při práci s rizikovými chemikáliemi je nutné dodržovat pravidla bezpečnosti práce:

• Do laboratoře je povolen přístup pouze v přezůvkách, je zakázána jakákoliv konzumace potravin a pití. Platí zákaz kouření (vztahuje se i na elektronické cigarety), zákaz práce pod vlivem léků ovlivňujících rozpoznávací a reakční schopnosti a zákaz vstupu osobám pod vlivem alkoholu a jiných psychotropních a omamných látek.
• Pro veškerou práci v laboratoři se vždy využívají ochranné pomůcky (zejména pracovní oděv, laboratorní plášť, jednorázové rukavice, ochranné brýle). Jestliže některé z pomůcek nebudou k dispozici, je nutné práci nezačínat, pomůcky je nutné nejdříve doplnit (studenti ohlašují zjištěné nedostatky vyučujícímu).
• Všichni pracovníci jsou, bez ohledu na vzdělání, pozici a pracovní zařazení, povinni se účastnit pravidelných interních školení zaměstnavatele zaměřených na bezpečnosti práce na pracovišti (BOZP), požární ochranu (PO) a školení o nakládaní s chemickými látkami a směsmi a s přípravky na ochranu rostlin (CHLAS a POR). Bez absolvování těchto školení nelze v laboratoři pracovat.   
• Z důvodu zajištění co nejvyšší bezpečnosti je v laboratoři zakázáno dlouhodobě přechovávat chemické látky a směsi, které nesouvisí s činností a zaměřením laboratoře. Ze stejného důvodu je v laboratoři povoleno skladovat jen nezbytně nutná množství používaných chemikálií (větší množství je možné uložit v ústavním skladu). Pravidelně provádět revize chemikálií umístěných v laboratoři.
• S pevnými chemikáliemi se nikdy nemanipuluje rukou, k vážení se používají čisté laboratorní lžičky nebo špachtle a plastové váženky.
• S žíravinami je nutno pracovat opatrně, používat předepsané ochranné pomůcky, nejlépe pracovat v digestoři, s roztoky je doporučeno pracovat na podložní fotografické misce.
• Je zakázáno pipetovat ústy. K pipetování nutno používat automatické pipety.
• Koncentrované kyseliny se ředí vléváním kyseliny do vody, kyselina se pomalu přilévá za stálého míchání roztoku.
• Při rozpouštění pevného hydroxidu sodného nebo draselného se sype hydroxid po malých částech za stálého míchání do vody; vždy se vyčká, až je předchozí podíl rozpuštěn. Připravovaný roztok je vhodné chladit pomocí vodní lázně.
• Menší množství rozlitých koncentrovaných kyselin či zásad se nejprve zneutralizuje vhodnou neutralizační směsí (7 % roztok hydrogenuhličitanu sodného nebo 7 % roztok kyseliny octové) a poté se místo do sucha utře vhodným materiálem (hadříkem nebo filtračním papírem – které se následně zlikvidují jako tříděný chemický odpad), kontaminované plochy se poté omyjí vodou (použití ochranných pomůcek je v celém průběhu dekontaminace samozřejmostí). V případě rozlití většího množství žíravin nebo nebezpečných chemických látek je doporučeno využít likvidační sadu.
• Pachy látek se nezjišťují přímým přičicháváním – výpary se opatrně přivanou mávnutím dlaně.
• Pokud není nezbytné (viz bod výše), je třeba se vyhnout vdechnutí i minimálních kvant chemických látek; chemikálie se nikdy nesmí ochutnávat.
• Manipulace s látkami dráždivými, dýmavými, páchnoucími a jedovatými, dále s koncentrovanými kyselinami a rozpouštědly, provádíme jen v digestoři s dobrým odtahem, v laboratoři je zakázáno s nimi pracovat.
• V laboratoři platí a jsou uplatňovány požární a poplachové směrnice Mendelovy univerzity: http://ipm.mendelu.cz/uredni-deska/26547-smernice.
• Bezpečnostní listy jsou k dispozici v elektronické podobě na sdíleném ústavním disku.
• Odpad nebezpečných a toxických látek (organická s vodou nemísitelná rozpouštědla, roztoky těžkých kovů apod.) je zakázáno vylévat do kanalizace, k likvidaci se používá určených nádob. Je rovněž důležité vyčistit každou pracovní pomůcku a laboratorní vybavení, které přijde do styku s nebezpečnými látkami.
• Netoxické louhy a kyseliny je možno vylévat do kanalizace za současného intenzivního ředění vodou.
• Při likvidaci nebezpečných chemikálií je potřeba vždy dbát bezpečnostních listů především s důrazem na vhodnosti míchání jednotlivých látek.

Pravidla pro likvidace odpadů vzniklých při nakládání s toxickými látkami

První pomoc při úrazech v laboratoři

Níže uvedený text je zjednodušeným návodem pro poskytnutí první pomoci a zohledňuje specifika, která s sebou přináší práce v chemické laboratoři. Osoba, která poskytuje první pomoc, musí dbát především na své vlastní bezpečí. Platí pravidlo: NESMÍ OHROZIT SÁM SEBE (použití ochranných pomůcek). Při jakémkoliv úrazu je nutné provést zápis (provádí zdravotník, pověřená osoba nebo vedoucí laboratoře) do Knihy úrazů (kancelář P1075) a zraněná osoba je povinna po lékařském ošetření dodat zaměstnavateli lékařskou zprávu. Zápis by měl být stručný, měl by obsahovat informaci o tom, kdy a jak se daný úraz stal, jak byl ošetřen a kým. Je nutné neprodleně doplnit do lékárničky spotřebovaný zdravotnický materiál.

Vniknutí chemikálie do oka

V případě vniknutí chemikálie nebo biologického materiálu do oka je nutné ihned provést výplach proudem vody (proplachujte několik minut). Při první pomoci se nepoužívají žádné neutralizační roztoky nebo kapky. Po poskytnutí první pomoci je nezbytné pro zraněnou osobu zajistit odborné ošetření a zavolat sanitku.

Poleptání kůže

Dojde-li k poleptání, je nezbytné nejprve odstranit potřísněný oděv a poté dlouhodobě omývat zasaženou kůži velkým proudem vody.

Poleptanou kůži je třeba zakrýt sterilním obvazem a zajistit zraněné osobě odborné ošetření. Při ošetřování je nezbytně nutné dbát na to, aby osoba poskytující první pomoc nebyla rovněž kontaminována látkou jako zraněná osoba.

Popálení

Dojde-li k popálení, je třeba co nejrychleji začít postižená místa ochlazovat studenou vodou. V případě popálení 3. a 4. stupně (3. stupeň – bílá kůže, popálené místo nebolí, protože došlo k poškození nervových zakončení; 4. stupeň – zuhelnatělá kůže) se na postiženou plochu neaplikují žádné masti ani léky. Po důkladném zchlazení se postižená plocha překryje sterilním obvazem a zajistí se pro zraněnou osobu odborné ošetření.

Zasažení elektrickým proudem

Je-li někdo zasažen elektrickým proudem a dotýká se stále elektrického zařízení, je nezbytně nutné ihned přerušit kontakt zasažené osoby se zdrojem elektrického proudu. Vypnout spotřebič, přerušit proud pomocí pojistek (v laboratoři) nebo vypnout proud hlavním vypínačem (uvést umístění hlavního vypínače, příp. čísla jističů). Vyžaduje-li to situace, je nutné zajistit, aby jiná osoba v průběhu záchrany z nevědomosti nenahodila jističe a neohrozila tím osoby poskytující první pomoc. Je-li zasažená osoba v bezvědomí, zkontrolujeme základní životní funkce, a případně ihned zahájíme nepřímou srdeční masáž a přivoláme odbornou pomoc (linka 155). Po zasažení elektrickým proudem je v každém případě nutné navštívit lékaře, srdeční potíže se mohou objevit až po několika hodinách od úrazu elektrickým proudem.

Otevřené poranění

Dojde-li k otevřenému poranění, je nejprve nutné zastavit krvácení. Drobná poranění omyjeme proudem vody, dezinfikujeme a sterilně ošetříme. Rozsáhlé, hluboké, silně krvácející nebo kontaminované poranění je nezbytné odborně ošetřit. Cizí tělesa se z rány při první pomoci nevyjímají, nijak se s nimi nemanipuluje.

V případě velkého krvácení (žilní/tepenné) je nutné poskytnout okamžitou první pomoc:

• Ránu obvázat sterilním obvazem.
• Poraněnou končetinu po přiložení obvazu (je-li to možné) zvednout nad úroveň srdce.
• Pokud obvaz prosákne, nikdy ho nesundávat, ale přiložit na něj další obvaz.
• Zraněnou osobu se snažit položit na zem. Pokud osoba sedí, měla by se alespoň opřít.
• Dále přiložit tlakový obvaz, pokud krvácení neustává, aplikovat další tlakový obvaz, popřípadě aplikovat škrtidlo (nutné poznamenat čas jeho aplikace).
• Okamžitě nebo ihned po poskytnutí první pomoci pacientovi volat 155.

Nadýchání se škodlivých látek a chemikálií         

Před samotným zákrokem je nutné se přesvědčit, že prostor není zamořen nebezpečnými výpary a nehrozí zkolabování zasahující osoby. Zasaženou osobu je nezbytné přemístit na čerstvý vzduch. Pro zraněnou osobu je nutné vždy zajistit odbornou pomoc.

Požití škodlivých látek a chemikálií

Dojde-li k požití škodlivých látek nebo chemikálií, je vždy nezbytně nutné zajistit zraněné osobě odbornou pomoc. Z konkrétního bezpečnostního listu zjistíme, jak se v takových případech chovat (záleží na typu chemikálie).

• Vždy je nutné vypláchnout ústní dutinu vodou; zvracení se musí vyvolat do 4 hodin po požití.
• Zvracení se nevyvolává u osob v bezvědomí, nebo v křeči.
• Zvracení se nesmí vyvolat po požití žíravin, pěnivých látek a některých organických těkavých látek (hrozí vdechnutí do plic), v těchto případech je nutné vypít velké množství vody.
• Pokud dojde k vážnému zranění je nezbytné s sebou k lékaři vzít i vytištěný bezpečnostní list chemikálie, která poranění způsobila. Vybrané bezpečnostní listy jsou umístěny přímo v laboratoři (duplicitně též na sekretariátě). Ostatní bezpečnostní listy jsou k dispozici na sdíleném disku.
• Každé poranění, poleptání, požití látky, stejně jako bolesti hlavy, hučení v uších a jiné příznaky je nezbytně nutné neprodleně hlásit vedoucímu laboratoře či pověřené osobě. Veškeré úrazy, poleptání, otravy apod., byť i zdánlivě nevýznamné, je nutno ohlásit a evidovat do Knihy úrazů (kancelář P1075).
• S veškerými úrazy se v případě potřeby jezdí do Úrazové nemocnice Brno (Ponávka 139/6, 602 00 Brno-střed, tel. 545 538 111, otevřeno 24 hodin).
• Výjimku představuje poranění očí, v takovém případě se zraněná osoba musí dopravit do FN u sv. Anny (tel. +420 543 182 849) nebo FN Bohunice (tel. +420 532 233 777), pozor je nutno ověřit, které z uvedených pracovišť má pohotovost! V případě potřeby volat 155 (112) a nahlásit rozsah poranění, stav pacienta, provedené zákroky a zeptat se, kam pacienta dopravit (viz výše).
• V případě potřeby lze kontaktovat Toxikologické informační středisko (www.tis-cz.cz, +420 224 919 293).
• V rámci přípravy na laboratorní cvičení musí posluchači předem prostudovat pracovní návod dané úlohy, seznámit se s chemickým principem a praktickým provedením úlohy, provést předepsané výpočty, vyhledat předepsané konstanty a seznámit se s fyzikálními a chemickými vlastnostmi (včetně toxicity) používaných látek. Před vlastním cvičením se příslušný vyučující ústně nebo písemným testem přesvědčí, zda se student na úlohu řádně připravil. Kdo prokáže závažné nedostatky, nemůže cvičení absolvovat a musí vykonat cvičení v náhradním termínu. Při opakované nepřipravenosti může být student vyloučen ze cvičení (tj. nemůže obdržet zápočet).
• Student je povinen se na laboratorní cvičení dostavit včas, v termínu daném rozvrhem anebo v termínu předem dohodnutém s vyučujícím nebo laborantem. Pozdní příchod může být důvodem k vyloučení z příslušného cvičení a nutnost vykonat cvičení v náhradním termínu.
• Při laboratorním cvičení je student povinen zachovávat všechna pravidla bezpečnosti práce a protipožární ochrany, udržovat kázeň a pořádek. Porušení těchto předpisů může znamenat vyloučení z příslušného cvičení. Při opakovaném porušení těchto předpisů může být vyučujícím vyloučen z celého cvičení (tj. student nemůže obdržet zápočet).
• Studenti smí vstupovat a pracovat v laboratoři pouze, pokud jsou přezutí do vhodné pracovní obuvi a mají na sobě laboratorní plášť, který musí být po celou dobu cvičení zapnutý. Ihned při vstupu do laboratoře si studenti nasadí ochranné laboratorní brýle, které musí mít po celou dobu pobytu v laboratoři na očích.
• Do laboratoře si student přináší pouze vybavení nezbytně nutné k vypracování dané úlohy (psací potřeby, laboratorní deník, kalkulačka). Oděv a zavazadla se odkládají v šatně nebo na jiném vhodném místě určeném vyučujícím. Za cennosti a elektroniku nelze ručit.
• V laboratoři je během výuky zakázáno používat mobilní telefon.
• Do laboratoře je zakázán vstup zvířatům.
• Pokud student potřebuje k práci další věci, které nejsou v laboratorním stole, obrátí se na příslušného vyučujícího (tj. nepůjčuje si bez dovolení žádné laboratorní vybavení, které mu nebylo svěřeno).
• Studenti se musí výhradně řídit písemnými a/nebo ústními pokyny vyučujícího a smějí provádět pouze práce uvedené v návodu k dané úloze. Studenti nesmí samovolně měnit předepsaný postup práce.
• Manipulovat s přístrojem (a to pouze v povoleném rozsahu) smí student teprve tehdy, až se seznámí s jeho obsluhou a obdrží souhlas vyučujícího. Vypínat přístroje lze rovněž jen se souhlasem vyučujícího s výjimkou situací, kdy by mohlo dojít k ohrožení života nebo zdraví. Veškeré poruchy nebo poškození přístrojů student ihned ohlásí vyučujícímu, v žádném případě je nesmí sám opravovat.

Další důležité informace
Na chodbě před laboratořemi je umístěna lékárnička.

Stručná pravidla pro studenty účastnící se výuky v laboratoři

Důležité kontakty